甘草次酸和阿霉素如何通过调节ERMMDs影响肝癌细胞凋亡

肝癌是全球范围内致死率较高的恶性肿瘤之一，其治疗方式主要包括手术切除、化疗、放疗等。近年来，对肝癌治疗的研究不断深入，联合用药成为一种有潜力的治疗策略。本篇文章旨在探讨甘草次酸（GA）联合阿霉素（DOX）在诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用及其可能的作用机制。

首先，我们通过体外培养HepG2细胞，利用细胞增殖毒性检测（CCK-8）法来评估药物对细胞活力的影响。实验分为对照组、阿霉素组、甘草次酸组以及阿霉素和甘草次酸联用组。结果显示，联用组对HepG2细胞活力的抑制效果更为显著，表明甘草次酸和阿霉素的联合使用可能增强了对肝癌细胞的杀伤作用。

进一步地，我们使用流式细胞术检测了各组细胞的凋亡水平。结果显示，联用组的细胞凋亡率较单一用药组有显著提高，这提示甘草次酸和阿霉素联合使用可能通过促进细胞凋亡来抑制肝癌细胞的生长。

接下来，我们探讨了甘草次酸和阿霉素如何影响内质网线粒体膜域结构（ERMMDs）。共定位荧光成像法的结果表明，联用组的内质网和线粒体之间的共定位水平显著降低，这可能影响了细胞内Ca²⁺的分布和功能。荧光探针法检测显示，联用组内质网中的Ca²⁺含量显著增多，而线粒体中的Ca²⁺含量显著减少，这可能是促进细胞凋亡的关键因素。

此外，我们还研究了甘草次酸和阿霉素对电压依赖性阴离子通道蛋白1 (VDAC1)、分子伴侣葡萄糖调节蛋白75 (GRP75)和1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)之间相互作用的影响。免疫共沉淀（CO-IP）结果显示，VDAC1与GRP75、IP3R之间的相互作用在联用组中显著降低，这可能是通过调节ERMMDs的形成来影响Ca²⁺转运的机制之一。

在分子层面上，我们检测了去乙酰化酶3(SIRT3)的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，联用组中SIRT3的表达水平显著升高，且SIRT3与VDAC1之间存在相互作用。免疫共沉淀实验进一步证实了这一点，并且发现VDAC1的乙酰化水平在联用组中显著降低。这提示SIRT3可能通过去乙酰化VDAC1，减弱VDAC1与GRP75和IP3R之间的相互作用，从而影响细胞凋亡。

综上所述，甘草次酸联合阿霉素可以诱导HepG2细胞的凋亡，其机制可能涉及SIRT3介导的VDAC1脱乙酰化修饰，减弱VDAC1、GRP75和IP3R三者之间的相互作用，进而调节ERMMDs的形成，影响内质网和线粒体之间的Ca²⁺转运，最终诱导细胞凋亡。这一发现为肝癌的联合药物治疗提供了新的理论依据，为未来的临床应用和药物开发指明了方向。

牛胜心

山西医科大学第二医院